中央空调冷却水军团菌检测方法简介

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　　一、 细菌培养和鉴定

　　1.样品处理：水样中的菌经过滤膜或离心浓缩，为减少杂菌生长，浓缩样品的一部分经酸处理与热处理，一部分不做处理，将上述处理与未处理样品分别接种GVPC琼脂平板，在5% CO2，35~36℃环境下培养7一lOd。

　　2.初步鉴定：军团菌的菌落颜色多样，通常呈白色、灰色、蓝色或紫色，也能显深褐 色、灰绿色、深红色。军团菌在GVPC选择性平板上可形成直径1～2 mm、灰白色、圆形、表面光滑、边缘清楚整齐的菌落，在紫外灯下，有荧光，为革兰氏阴性杆菌。在选择性平板上挑选可疑菌落，接种于BCYE琼脂平板和 BCYE-Cys平板进行传代培养，36±1℃培养至少 2d，凡在前者上生长而在后者上不生长的即为军团菌。

　　3.生化鉴定：常用的生化实验有糖发酵试验、淀粉水解试验、触酶试验、明胶液化试验、内酰胺酶试验、硝酸盐还原试验、尿素酶试验、马尿酸盐水解试验等。

　　二、分型鉴定：采用军团菌乳胶凝集试剂盒进行分型诊断，我国常见的型别有Lp1、Lp3、Lp5、Lp6、Lp9等。

　　三、PCR 法检测菌株特异系性基因：主要检测基因种类为军团菌属特异基因5sRNA、16sRNA和嗜肺军团菌种特异基因Mip基因。

　　四、其他检测方法：常用的方法有放射免疫法(R1A)、酶免疫法(EIA)、直接荧光抗体法(DFA)、免疫层析法(ICA)等多种方法;此外，核酸探针技术是近几年发展起来的一种快速诊断军团菌病原体的方法，根据军团菌的核酸序列合成一段寡核苷酸，用同位素标记，并与被检测核酸分子杂交，通过检测放射性信号，确定军团菌感染。这种方法具有特异性高，快速等优点。